Διαγνωστική ELISA εξάρτηση MQCA για την πάπια 96 χοιρινού κρέατος κοτόπουλου φρεάτια/ευαισθησία 0,5 εξαρτήσεων Ppb

Κιτ δοκιμής MQCA ELISA για χοιρινό κοτόπουλο πάπια 96 πηγαδιών/Κιτ Ευαισθησία 0,5 ppb

 

1. Αρχή

Αυτό το κιτ δοκιμής βασίζεται στην ανταγωνιστική ενζυμική ανοσοδοκιμασία για την ανίχνευση του MQCA στο δείγμα.Τα αντιγόνα σύζευξης είναι προεπικαλυμμένα στις λωρίδες μικρο-φρεατίων.Το MQCA στο δείγμα και τα αντιγόνα σύζευξης που έχουν προεπικαλυφθεί στις λωρίδες των μικροφρεατίων ανταγωνίζονται για το αντίσωμα αντι-MQCA.Μετά την προσθήκη του συζυγούς ενζύμου, το υπόστρωμα TMB προστίθεται για χρωματισμό.Η τιμή οπτικής πυκνότητας (OD) του δείγματος έχει αρνητική συσχέτιση με το MQCA σε αυτό.Αυτή η τιμή συγκρίνεται με την τυπική καμπύλη και στη συνέχεια λαμβάνεται η συγκέντρωση MQCA.

 

2. Τεχνικές προδιαγραφές

Ευαισθησία: 0,5 ppb
Θερμοκρασία θερμοκοιτίδας: 25℃
Χρόνος θερμοκοιτίδας: 30 λεπτά έως 15 λεπτά

Οριο ανίχνευσης:
Ιστός 1 ppb

Ρυθμός διασταυρούμενης αντίδρασης:
MQCA 100%
Olaquindox <0,1%
Ποσοστό ανάκτησης:
Ιστός 85%±10%

 

3. Εξαρτήματα

 

1	Λωρίδες μικρο-πηγαδιού	12 λωρίδες με 8 αφαιρούμενα φρεάτια η καθεμία
2	6× πρότυπο διάλυμα (1 mL το καθένα)	0 ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Συμπυκνωμένο συζυγές ενζύμου	1 ml	κόκκινο καπέλο
4	Διάλυμα εργασίας αντισωμάτων	8 ml	μπλε καπάκι
5	Υπόστρωμα Α	7 ml	άσπρο καπέλο
6	Υπόστρωμα Β	7 ml	μαύρο καπέλο
7	Διακοπή λύσης	7 ml	κίτρινο καπάκι
8	Επαναδιαλυτικό διάλυμα	50 ml	διαφανές καπάκι
9	20× συμπυκνωμένο ρυθμιστικό πλύσης	40 ml	άσπρο καπέλο

 

4. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται

1) Εξοπλισμός: συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών (450 nm / 630 nm), ομογενοποιητής, ταλαντωτής, φυγόκεντρος, πιπέτες μέτρησης, συσκευή ξήρανσης αζώτου και ζυγός (αντίστροφη ευαισθησία 0,01 g), Επωαστήρας.
2) Μικροπιπέτες: μονοκάναλοι 20 έως 200 µL και 100 έως 1000 µL και πολυκάναλοι 30 έως 300 µl.
3) Αντιδραστήρια: Οξεικός αιθυλεστέρας, n-εξάνιο, HCl, NaCl, CH3CN

 

5. Προεπεξεργασία δείγματος

Οδηγίες
Τα ακόλουθα σημεία πρέπει να ληφθούν υπόψη πριν από την προεπεξεργασία κάθε είδους δείγματος:
1) Μόνο τα άκρα μιας χρήσης μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τα πειράματα και τα ρύγχη πρέπει να αλλάζονται όταν χρησιμοποιούνται για την απορρόφηση διαφορετικών αντιδραστηρίων.
2) Πριν από το πείραμα, κάθε πειραματικό σκεύος πρέπει να ελέγχεται ότι είναι καθαρό και θα πρέπει να καθαρίζεται εκ νέου εάν χρειάζεται, προκειμένου να αποφευχθεί η μόλυνση που παρεμποδίζει τα πειραματικά αποτελέσματα.

Η προετοιμασία των δειγμάτων
1) Εκχύλισμα δείγματος (Αποθηκεύστε στους 2~8 ℃ για 1 μήνα): Πάρτε 8,6 ml πυκνού HCl, προσθέστε απιονισμένο νερό στα 500 ml και, στη συνέχεια, προσθέστε 10 g NaCl για να λάβετε το εκχύλισμα δείγματος.

5.1 Ιστός ζώων και πουλερικών (Κοτόπουλο, πάπια, χοιρινό):
1. Πάρτε 2± 0,05 g του ομογενοποιημένου δείγματος σε σωληνάριο φυγοκέντρησης 50 ml.
2. Προσθέστε 4 mL εκχύλισμα δείγματος, ανακινήστε καλά για 1 λεπτό.
3. Προσθέστε 4 ml οξικό αιθυλεστέρα και 2 ml CH3CN, ανακινήστε σωστά για 10 δευτερόλεπτα.Φυγοκεντρήστε στα 4000 r/min σε θερμοκρασία δωματίου (20 - 25 ℃) για 10 λεπτά (Σημείωση: Αυτό το βήμα χρειάζεται μόνο ανακίνηση για 10 δευτερόλεπτα, η υπερβολική ανακίνηση θα οδηγήσει σε γαλακτωματοποίηση, εάν εμφανιστεί γαλακτωματοποίηση, πάρτε ένα ορισμένο υπερκείμενο και στη συνέχεια ανακινήστε ελαφρά το σωλήνα για 5 δευτερόλεπτα , φυγοκεντρήστε ξανά και μετά μπορείτε να πάρετε αρκετό υπερκείμενο)
4. Πάρτε 3 mL οργανικής φάσης επάνω στο στρώμα σε ένα διαφανές δοχείο, από κάτω για να στεγνώσετε με άζωτο ή αέρα σε
56℃ λουτρό νερού;
5. Προσθέστε 1 ml Ν-εξάνιο, ανακινήστε για 30 δευτερόλεπτα, στη συνέχεια προσθέστε 0,5 ml διαλύματος επαναδιάλυσης, ανακινήστε και ανακατέψτε καλά για 30 δευτερόλεπτα.φυγοκεντρήστε στα 4000 r/min σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) για 5 λεπτά.
6. Αφαιρέστε την οργανική φάση της ανώτερης στρώσης. Πάρτε 50 µL κάτω στρώσης για ανάλυση.
Αναδίπλωση αραίωσης του δείγματος: 0,5

 

6. Διαδικασίες ELISA

6.1 Οδηγίες
1) Φέρτε όλα τα αντιδραστήρια και τις ταινίες μικροπηγαδιών σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) πριν από τη χρήση.
2) Επιστρέψτε όλα τα αντιδραστήρια στους 2-8 ℃ αμέσως μετά τη χρήση.
3) Η αναπαραγωγιμότητα της ανάλυσης ELISA, σε μεγάλο βαθμό, εξαρτάται από τη συνοχή του πλυσίματος των πλακών.Η σωστή λειτουργία του πλυσίματος των πλακών είναι το βασικό σημείο στις διαδικασίες της ELISA.
4) Για την επώαση σε σταθερές θερμοκρασίες, όλα τα δείγματα και τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφεύγουν την έκθεση στο φως και κάθε μικροπλάκα θα πρέπει να σφραγίζεται από την καλυπτική μεμβράνη.

6.2 Διαδικασίες λειτουργίας
1) Βγάλτε όλα τα απαραίτητα αντιδραστήρια και τοποθετήστε τα σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) για τουλάχιστον 30 λεπτά.Σημειώστε ότι κάθε αντιδραστήριο πρέπει να ανακινείται για να αναμειχθεί ομοιόμορφα πριν από τη χρήση.
2) Πάρτε τις απαιτούμενες λωρίδες μικρο-πηγαδιών και πλαίσια πλακών.Ξανασφράγισε την αχρησιμοποίητη μικροπλάκα, αποθηκευμένη στους 2-8 ℃.
3) Προετοιμασία διαλύματος: αραιώστε 40 mL του 20× πυκνού ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης με απιονισμένο νερό σε 1:19 (1 μέρος 20× συμπυκνωμένο ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης + 19 μέρη απιονισμένο νερό) ή παρασκευάστε ανάλογα με την ποσότητα που απαιτείται.
4) Αρίθμηση: αριθμήστε τα μικροφρεάτια σύμφωνα με τα δείγματα και το πρότυπο διάλυμα.Κάθε δείγμα και πρότυπο διάλυμα πρέπει να εκτελούνται εις διπλούν.καταγράφουν τις θέσεις τους·
5) Προετοιμάστε το μίγμα του διαλύματος εργασίας αντισώματος και του συζυγούς συμπυκνωμένου ενζύμου: Αναμείξτε το διάλυμα εργασίας αντισώματος και το συζυγές συμπυκνωμένο ένζυμο σε αναλογία 10:1 ομοιόμορφα (1000ul διάλυμα εργασίας αντισώματος + 100ul συζυγές συμπυκνωμένου ενζύμου, αυτό το διάλυμα μίγματος θα πρέπει να χρησιμοποιηθεί μόλις παρασκευαστεί, δεν μπορεί να αποθηκευτεί, η ποσότητα συσκευασίας έχει επιπλέον ποσότητα, προετοιμάστε όπως η αναλογία είναι εντάξει.)
6) Προσθέστε 20 µL του δείγματος ή του τυπικού διαλύματος για να διαχωρίσετε τα διπλά φρεάτια και, στη συνέχεια, προσθέστε 70 μL μίγματος διαλύματος διαλύματος εργασίας αντισώματος και συζυγούς συμπυκνωμένου ενζύμου σε κάθε φρεάτιο.Ανακατεύουμε ανακινώντας απαλά, σφραγίζουμε τη μικροπλάκα με την καλυπτική μεμβράνη και επωάζουμε στους 25℃ στο σκοτάδι για 30 λεπτά.
7) Πλύνετε τη μικροπλάκα με το ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης στα 250 µL/φρεάτιο για τέσσερις έως πέντε φορές.Μουλιάζετε το πηγάδι με το ρυθμιστικό πλύσης για 15-30 δευτερόλεπτα, τυλίγετε για να στεγνώσει με απορροφητικό χαρτί (αν υπάρχουν οι φυσαλίδες μετά το χτύπημα, κόψτε τις με τις καθαρές μύτες).
8) Χρωματισμός: Προσθέστε 50 µL του διαλύματος του υποστρώματος Α και 50 μL του διαλύματος Β σε κάθε φρεάτιο.Ανακατεύουμε ανακινώντας απαλά και επωάζουμε στους 25 ℃ για 15 λεπτά στο σκοτάδι για χρωματισμό.
9) Προσδιορισμός: προσθέστε 50 µL διαλύματος τερματισμού σε κάθε φρεάτιο.Ανακατεύουμε ανακινώντας απαλά.Ρυθμίστε το μήκος κύματος της συσκευής ανάγνωσης μικροπλακών στα 450 nm για να προσδιορίσετε την τιμή OD.(Συνιστούμε να διαβάσετε την τιμή OD στο διπλό μήκος κύματος 450/630 nm εντός 5 λεπτών) .

 

7. Κρίση αποτελέσματος

Υπάρχουν δύο μέθοδοι για να κρίνουμε τα αποτελέσματα.το πρώτο είναι η πρόχειρη κρίση, ενώ το δεύτερο είναι ο ποσοτικός προσδιορισμός.Σημειώστε ότι η τιμή OD του δείγματος έχει αρνητική συσχέτιση με το περιεχόμενο του MQCA.

7.1 Ποιοτικός προσδιορισμός
Το εύρος συγκέντρωσης (ng/mL) μπορεί να ληφθεί από τη σύγκριση της μέσης τιμής OD του δείγματος με αυτή του προτύπου διαλύματος.Υποθέτοντας ότι η τιμή OD του δείγματος Ⅰ είναι 0,3 και αυτή του δείγματος Ⅱ είναι 1,0, ενώ αυτές των τυπικών διαλυμάτων είναι ως εξής: 2,043 για 0 ​​ppb, 1,716 για 0,5 ppb, 1,215 για 1,5 ppb, 0,54 ppb, 0,313 για 13,5 ppb και 0,155 για 40,5 ppb, αντίστοιχα το εύρος συγκέντρωσης του δείγματοςⅠ είναι 13,5 έως 40,5 ppb και του δείγματος Ⅱ είναι 1,5 έως 4,5 ppb.

7.2 Ποσοτικός προσδιορισμός
Οι μέσες τιμές των τιμών απορρόφησης είναι ισοδύναμες με το ποσοστό της μέσης τιμής OD (B) του δείγματος και του προτύπου διαλύματος διαιρούμενο με την τιμή OD (B0) του πρώτου πρότυπου διαλύματος (0 πρότυπο) και στη συνέχεια πολλαπλασιάζεται επί 100% , αυτό είναι,

 

Ποσοστό τιμής απορρόφησης =	σι	×100%
	Β0

 

 

B—η μέση τιμή OD (διπλά φρεάτια) του δείγματος ή του τυπικού διαλύματος
B0—η μέση τιμή OD του τυπικού διαλύματος 0 ng/mL
Σχεδιάστε την πρότυπη καμπύλη με τα ποσοστά απορρόφησης των τυπικών διαλυμάτων και τις ημιλογαριθμικές τιμές των τυπικών διαλυμάτων MQCA (ng/mL) ως άξονες Υ και Χ, αντίστοιχα.Διαβάστε την αντίστοιχη συγκέντρωση του δείγματος από την τυπική καμπύλη ενσωματώνοντας το ποσοστό απορρόφησής του στην τυπική καμπύλη.Η προκύπτουσα τιμή στη συνέχεια πολλαπλασιάζεται με την αντίστοιχη πτυχή αραίωσης, λαμβάνοντας έτσι τελικά τη συγκέντρωση MQCA στο δείγμα.
Η χρήση του επαγγελματικού λογισμικού ανάλυσης αυτού του κιτ θα είναι πιο βολική για την ακριβή και γρήγορη ανάλυση μεγάλου όγκου δειγμάτων.(Επικοινωνήστε μαζί μας για αυτό το λογισμικό)

 

8. Προφυλάξεις

1. Η θερμοκρασία δωματίου κάτω από 25 ℃ ή η θερμοκρασία των αντιδραστηρίων και τα δείγματα που δεν επιστρέφονται στη θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) θα οδηγήσουν σε χαμηλότερη τυπική τιμή OD
2. Η ξήρανση της μικροπλάκας στη διαδικασία πλύσης θα συνοδεύεται από καταστάσεις που περιλαμβάνουν τις μη γραμμικές τυπικές καμπύλες και την ανεπιθύμητη αναπαραγωγιμότητα
3. Ανακατέψτε ομοιόμορφα κάθε μείγμα αντιδραστηρίου και αντίδρασης και πλύνετε καλά τη μικροπλάκα, διαφορετικά θα υπάρξει ανεπιθύμητη αναπαραγωγιμότητα
4. Το ενδιάμεσο διάλυμα είναι το διάλυμα θειικού οξέος 2 M, αποφύγετε την επαφή με το δέρμα.
5. Τοποθετήστε την αχρησιμοποίητη μικροπλάκα σε μια σακούλα αυτόματης σφράγισης για να τη σφραγίσετε ξανά.Η τυπική ουσία και ο άχρωμος σχηματιστής χρώματος είναι ευαίσθητοι στο φως και επομένως δεν μπορούν να εκτεθούν απευθείας στο φως
6. Μη χρησιμοποιείτε το κιτ πέραν της ημερομηνίας λήξης του.Η χρήση αραιωμένων ή νοθευμένων αντιδραστηρίων από τα κιτ θα οδηγήσει σε αλλαγές στην ευαισθησία και στις ανιχνευόμενες τιμές OD.Μην αλλάζετε τα αντιδραστήρια από τα κιτ διαφορετικών αριθμών παρτίδας για να τα χρησιμοποιήσετε
7. Απορρίψτε το χρωστικό διάλυμα με οποιοδήποτε χρώμα που υποδηλώνει τον εκφυλισμό αυτού του διαλύματος.Η τιμή ανίχνευσης του τυπικού διαλύματος 0 μικρότερη από 0,5 υποδηλώνει τον εκφυλισμό του
8. Η βέλτιστη θερμοκρασία αντίδρασης είναι 25 ℃, και οι πολύ υψηλές ή πολύ χαμηλές θερμοκρασίες θα οδηγήσουν στις αλλαγές στην ευαισθησία ανίχνευσης και τις τιμές OD.

 

9. Αποθήκευση και ημερομηνία λήξης

Αποθήκευση: Αποθηκεύστε στους 2-8 ℃, όχι κατεψυγμένο.
Ημερομηνία λήξης: 12 μήνες;Η ημερομηνία παραγωγής αναγράφεται στο κουτί.
Σημείωση: Εάν η συσκευασία Vacuum της μικροπλάκας έχει διαρροή, εξακολουθεί να ισχύει για χρήση, μην επηρεάζετε το αποτέλεσμα της δοκιμής, χαλαρώστε στη χρήση.

 

 

 

 

 

Q1: Πότε θα αποσταλεί;
A1: Θα στείλουμε τα αγαθά για εσάς το συντομότερο δυνατό εντός 7 εργάσιμων ημερών από τη λήψη της πληρωμής.(Σε περίπτωση εξωτερικών παραγόντων όπως η επιδημία, ο τοκετός μπορεί να καθυστερήσει)

 

Ε2: Υποστηρίζει OEM/ODM;
A2: Μπορεί να υποστηριχθεί, αλλά η συγκεκριμένη ποσότητα πρέπει να είναι περισσότερα από 100.000 τεμάχια, κάτι που είναι βολικό για προσαρμοσμένα προϊόντα.

 

Ε3: Πώς είναι το εργοστάσιό σας όσον αφορά τον ποιοτικό έλεγχο;
A3: Έχουμε πιστοποιήσει εθνικά ISO9001 και ISO13485.Η διαδικασία παραγωγής μας συμμορφώνεται με τις τυπικές διαδικασίες για τη διασφάλιση της βέλτιστης ποιότητας των προϊόντων.

 

Ε4: Πώς να παρέχετε την εξυπηρέτηση μετά την πώληση;
A4: Παρέχουμε επαγγελματική ηλεκτρονική τεχνική εξυπηρέτηση μετά την πώληση.Μπορούμε να σας παρέχουμε καθοδήγηση ένας προς έναν μέσω βίντεο, τηλεφώνου κ.λπ.

 

Ε5: Ποια είναι η μέθοδος πληρωμής;
A5: Λαμβάνουμε πληρωμή από T/T.

 

Ε6: Πώς να στείλετε;
A6: Επιλέξτε την καλύτερη μέθοδο αποστολής για εσάς, λαμβάνοντας προσφορές από τους πολλούς συνεργαζόμενους μεταφορείς μας και αποστέλλετε επίσης σύμφωνα με τις απαιτήσεις σας.