Amantadine διαγνωστική εξάρτηση της ELISA για την πάπια 96 χοιρινού κρέατος κοτόπουλου φρεάτια/ευαισθησία 0,2 εξαρτήσεων Ppb

Amantadine ELISA Test Kit για Κοτόπουλο χοιρινό πάπια 96 Wells/Kit Ευαισθησία 0,2 ppb

 

1. Αρχή

Αυτό το κιτ δοκιμής βασίζεται στην ανταγωνιστική ενζυμική ανοσοδοκιμασία για την ανίχνευση της αμανταδίνης.Το αντιγόνο σύζευξης είναι προεπικαλυμμένο στις λωρίδες μικρο-φρεατίων.Η αμανταδίνη στο δείγμα και τα αντιγόνα σύζευξης που έχουν προεπικαλυφθεί στις λωρίδες των μικροφρεατίων ανταγωνίζονται για τα αντισώματα κατά της αμανταδίνης.Μετά την προσθήκη του συζυγούς ενζύμου, το υπόστρωμα TMB προστίθεται για χρωματισμό.Η τιμή οπτικής πυκνότητας (OD) του δείγματος έχει αρνητική συσχέτιση με την αμανταδίνη στο δείγμα.Αυτή η τιμή συγκρίνεται με την τυπική καμπύλη και στη συνέχεια λαμβάνονται τα υπολείμματα αμανταδίνης.

 

2. Τεχνικές προδιαγραφές

Ευαισθησία: 0,2ppb
Θερμοκρασία θερμοκοιτίδας: 25℃
Χρόνος θερμοκοιτίδας: 30 λεπτά έως 15 λεπτά

Οριο ανίχνευσης:
Κοτόπουλο, πάπια 0,2 ppb

Ρυθμός διασταυρούμενης αντίδρασης:
αμανταδίνη 100%

Ποσοστό ανάκτησης:
Κοτόπουλο, πάπια 90±25%

 

3. Εξαρτήματα

 

1	Λωρίδες μικρο-πηγαδιού	12 λωρίδες με 8 αφαιρούμενα φρεάτια η καθεμία
2	6× πρότυπο διάλυμα (1 mL το καθένα)	0ppb	0,2 ppb
		0,8 ppb	3,2 ppb
		12,8 ppb	51,2 ppb
3	Σύζευγμα ενζύμου	7 ml	κόκκινο καπέλο
4	Διάλυμα εργασίας αντισωμάτων	7 ml	μπλε καπάκι
5	Υπόστρωμα Α	7 ml	άσπρο καπέλο
6	Υπόστρωμα Β	7 ml	μαύρο καπέλο
7	Διακοπή λύσης	7 ml	κίτρινο καπάκι
8	Εκχυλιστικό	50 ml*2	διαφανές καπάκι
9	20× συμπυκνωμένο ρυθμιστικό πλύσης	15 ml	άσπρο καπέλο
10	5× πυκνό διάλυμα επαναδιάλυσης	10 ml	άσπρο καπέλο

 

4. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται

 

1) Εξοπλισμός: ELISA Reader (450 nm/630nm), ομογενοποιητής, αναδευτήρας, φυγόκεντρος, ζυγός: 0,01 g ευαίσθητη σε ποσότητα, συσκευή ξήρανσης αζώτου, επωαστήρας, βαθμονομημένες πιπέτες, εκτυπωτής

2) Μικροπιπέτες: μονοκάναλες 20 ml ~ 200 ml, 100 ml ~ 1000 ml, πολυκάναλες 30 ~ 300 μl

3) Αντιδραστήρια: Ακετονιτρίλιο, κ-εξάνιο.

 

5. Προεπεξεργασία δείγματος

 

Οδηγίες (Τα ακόλουθα σημεία πρέπει να ληφθούν υπόψη πριν από την προεπεξεργασία)

1) Μόνο τα άκρα μιας χρήσης μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τα πειράματα και τα ρύγχη πρέπει να αλλάζονται όταν χρησιμοποιούνται για την απορρόφηση διαφορετικών αντιδραστηρίων.

2) Πριν από το πείραμα, κάθε πειραματικό σκεύος πρέπει να είναι καθαρό και θα πρέπει να καθαρίζεται εκ νέου εάν είναι απαραίτητο, προκειμένου να αποφευχθεί η μόλυνση που παρεμποδίζει τα πειραματικά αποτελέσματα.

 

Προετοιμασία του διαλύματος πριν από την προεπεξεργασία του δείγματος:

1) Διάλυμα εκχυλίσματος δείγματος

6 μέρη ακετονιτρίλιο + 1 μέρος εκχυλιστικό για να ληφθεί το έτοιμο προς χρήση διάλυμα εκχυλίσματος δείγματος.

2) Διάλυμα επαναδιάλυσης δειγμάτων

Χρησιμοποιήστε 1 μέρος συμπυκνωμένου διαλύματος επαναδιάλυσης (5Χ) και διαλύστε με 4 μέρη απιονισμένου νερού για να λάβετε το έτοιμο προς χρήση διάλυμα επαναδιάλυσης δείγματος.

Προετοιμασία δειγμάτων

 

5.1 Προετοιμασία δείγματος κοτόπουλου, πάπιας

1) Πάρτε 3,0±0,05 g ομογενοποιημένου δείγματος ιστού σε σωλήνα φυγοκέντρησης 50 ml.Προσθέστε 6 ml διαλύματος εκχυλίσματος δείγματος, ανακινήστε για 3 λεπτά, φυγοκεντρήστε με ταχύτητα άνω των 4000 r/min σε θερμοκρασία δωματίου (20 - 25 ℃) για 5 λεπτά.

2) Πάρτε 2 ml διαυγούς οργανικής φάσης σε ένα στεγνό δοχείο, φυσήξτε για να στεγνώσει με άζωτο ή αέρα στους 50~60 ℃.

3) Προσθέστε αρχικά 1 ml n-εξάνιο, στη συνέχεια προσθέστε 0,5 ml διαλύματος επαναδιάλυσης δείγματος, ανακατέψτε για 30 δευτερόλεπτα, φυγοκεντρήστε σε πάνω από 4000 r/min σε θερμοκρασία δωματίου (20 - 25℃) για 5 λεπτά, απορρίψτε το ν-εξάνιο της επάνω στρώσης.

4) Πάρτε το κάτω στρώμα υγρό 50μl για δοκιμή

Συντελεστής αραίωσης: 0,5

 

6. Διαδικασίες ELISA

 

6.1 Οδηγίες

1. Φέρτε τα αντιδραστήρια ELISA σε θερμοκρασία δωματίου (20 - 25 °C) πριν από τη χρήση.

2. Επαναφέρετε τα αντιδραστήρια ELISA στους 2-8 ℃ αμέσως μετά τη χρήση

3. Η αναπαραγωγιμότητα ELISA στη διαδικασία ανάλυσης εξαρτάται σε μεγάλο βαθμό από τη συνοχή της πλάκας πλύσης, η σωστή λειτουργία της πλάκας πλύσης είναι το σημείο προσδιορισμού του προγράμματος ELISA

4. Σε κάθε διαδικασία επώασης σταθερής θερμοκρασίας, αποφύγετε την έκθεση στο φως, σφραγίστε τη μικροπλάκα με την καλυπτική μεμβράνη

 

6. 2 Διαδικασίες λειτουργίας

1. Φέρτε το κιτ δοκιμής σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) για τουλάχιστον 30 λεπτά, σημειώστε ότι κάθε αντιδραστήριο πρέπει να ανακινείται ομοιόμορφα πριν από τη χρήση.

2. Τοποθετήστε τις απαιτούμενες λωρίδες μικροπηγαδιών σε πλαίσια πλάκας.Επανασφραγίστηκε η αχρησιμοποίητη μικροπλάκα, αποθηκευμένη στους 2-8 ℃, όχι κατεψυγμένη.

3. Παρασκευή διαλύματος: αραιώστε το 15 ml 20× πυκνό ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης με απιονισμένο νερό στα 300 ml.

4. Αρίθμηση: αριθμήστε τα μικροφρεάτια σύμφωνα με τα δείγματα και το πρότυπο διάλυμα.Κάθε δείγμα και πρότυπο διάλυμα πρέπει να εκτελούνται εις διπλούν.καταγράψουν τις θέσεις τους.

5. Προσθήκη προτύπου/δείγματος: Προσθέστε 50 µL του δείγματος ή του προτύπου διαλύματος σε χωριστά διπλά φρεάτια και, στη συνέχεια, προσθέστε το συζυγές ενζύμου, 50 µL/φρεάτιο.στη συνέχεια διάλυμα εργασίας αντισώματος, 50 µL/φρεάτιο.Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας χειροκίνητα την πλάκα, σφραγίστε τη μικροπλάκα με την καλυπτική μεμβράνη και επωάστε στους 25 °C για 30 λεπτά στο σκοτάδι.

6. Πλύνετε τη μικροπλάκα: Ανοίξτε προσεκτικά τη μεμβράνη του καλύμματος, χύστε το υγρό από το μικροπηγάδι.Προσθέστε 250 µL/πηγάδι αραιωμένου ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης, πλύνετε πλήρως για 4-5 φορές, 15-30 δευτερόλεπτα κάθε φορά, στη συνέχεια αφαιρέστε και τυλίξτε για να στεγνώσει με απορροφητικό χαρτί. (Χρησιμοποιήστε αχρησιμοποίητο δόρυ για να τρυπήσετε τη φυσαλίδα μετά το στέγνωμα)

7. Χρωματισμός: Προσθέστε 50 µL διαλύματος υποστρώματος Α και στη συνέχεια 50 μL διαλύματος Β σε κάθε φρεάτιο.Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας το πιάτο με το χέρι, και επωάστε στους 25 °C για 15 λεπτά στο σκοτάδι για χρωματισμό.

8. Προσδιορισμός: Προσθέστε 50 µL του διαλύματος τερματισμού σε κάθε φρεάτιο.Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας το πιάτο με το χέρι.Ρυθμίστε το μήκος κύματος της συσκευής ανάγνωσης μικροπλακών στα 450 nm για να προσδιορίσετε την τιμή OD κάθε φρεατίου.(Συνιστούμε να διαβάσετε την τιμή OD στο διπλό μήκος κύματος 450/630 nm εντός 5 λεπτών).

 

7. Κρίση αποτελέσματος

Υπάρχουν δύο μέθοδοι για να κρίνουμε τα αποτελέσματα.το πρώτο είναι η πρόχειρη κρίση, ενώ το δεύτερο είναι ο ποσοτικός προσδιορισμός.Σημειώστε ότι η τιμή OD του δείγματος έχει αρνητική συσχέτιση με την αμανταδίνη στο δείγμα

7.1 Ποιοτικός προσδιορισμός
Το εύρος συγκέντρωσης (ng/ml) μπορεί να ληφθεί με σύγκριση της μέσης τιμής απορρόφησης με τα πρότυπα.Ας υποθέσουμε ότι η τιμή απορρόφησης του Sample One είναι 0,3, το Sample Two είναι 1,0 και τα πρότυπα είναι: 0ppb του 2,243;0,2 ppb από 2,054;0,8ppb από 1,715;3,2 ppb από 1,074;12,8ppb από 0,451;51,2 ppb από 0,155.Τότε η συγκέντρωση του δείγματος είναι στην περιοχή 12,8ppb ~ 51,2ppb.Το δείγμα δύο είναι 3,2 ppb ~ 12,8 ppb.Το εύρος συγκέντρωσης της αμανταδίνης στα δείγματα μπορεί να ληφθεί πολλαπλασιάζοντας με την αντίστοιχη αραίωση του δείγματος.
 

7. 2 Ποσοτική Ανάλυση
Για να υπολογιστεί η συγκέντρωση των δειγμάτων, θα πρέπει να γίνει μια πρότυπη καμπύλη.Πριν γίνει η τυπική καμπύλη, θα πρέπει να είναι γνωστή η έννοια της % απορρόφησης.
Υπολογισμός % απορρόφησης:

 

Ποσοστό τιμής απορρόφησης =	σι	×100%
	Β0

 

B—η μέση τιμή OD του δείγματος ή του τυπικού διαλύματος
B0—η μέση τιμή OD του τυπικού διαλύματος 0 ng/mL
Το μηδενικό πρότυπο είναι επομένως ίσο με 100 % και οι τιμές απορρόφησης αναφέρονται σε ποσοστά.Οι τιμές που υπολογίζονται για τα πρότυπα εισάγονται σε ένα σύστημα συντεταγμένων σε ημιλογαριθμικό γραφικό χαρτί έναντι της συγκέντρωσης αμανταδίνης [ng/mL].Η συγκέντρωση αμανταδίνης σε ng/mL (ppb) που αντιστοιχεί στην απορρόφηση κάθε δείγματος μπορεί να διαβαστεί από την καμπύλη βαθμονόμησης.
Ένα ειδικό λογισμικό για την ανάλυση αποτελεσμάτων της ELISA θα διευκολύνει διπλούς ή πολλαπλούς προσδιορισμούς.Εάν χρειάζεστε, καλέστε για να ζητήσετε.

 

8. Προφυλάξεις

 

1. Η τυπική τιμή OD θα είναι χαμηλή εάν η θερμοκρασία δωματίου είναι χαμηλότερη από 25℃ ή η θερμοκρασία του αντιδραστηρίου και το δείγμα δεν έχει επιστρέψει σε θερμοκρασία δωματίου (20-25℃).
2. Η μικροπλάκα στεγνώνει κατά τη διαδικασία πλύσης, η οποία θα συνοδεύεται από μη γραμμικότητα της τυπικής καμπύλης και κακή αναπαραγωγιμότητα.Επομένως, προχωρήστε στο επόμενο βήμα αμέσως μετά το πλύσιμο.
3. Ανακατέψτε καλά πριν προσθέσετε τυχόν αντιδραστήρια.
4. Το ενδιάμεσο διάλυμα είναι διάλυμα θειικού οξέος 2Μ, αποφύγετε την επαφή με το δέρμα.
5. Μη χρησιμοποιείτε το κιτ μετά την ημερομηνία λήξης.Η χρήση αραιωμένων ή νοθευμένων αντιδραστηρίων από το κιτ μπορεί να οδηγήσει σε αλλαγές στην ευαισθησία και στην ανίχνευση των τιμών OD.Μην αντικαθιστάτε τα αντιδραστήρια σε διαφορετικές παρτίδες κιτ.
6. Αποθήκευση: Φυλάσσετε σε θερμοκρασία 2-8°C, μην καταψύχετε.Επανασφραγίστε τις αχρησιμοποίητες μικροπλάκες σε αυτοσφραγιζόμενες σακούλες.Τα τυπικά υλικά και οι άχρωμοι ζεύκτες είναι ευαίσθητα στο φως και δεν μπορούν να εκτεθούν απευθείας στο φως.
7. Απορρίψτε οποιοδήποτε διάλυμα χρωματισμού του οποίου το χρώμα δείχνει ότι το διάλυμα έχει υποβαθμιστεί.Η τιμή ανίχνευσης (450/630 nm) του τυπικού διαλύματος 0 (0 ppb) είναι μικρότερη από 0,5 ((A450nm<0,5)) υποδηλώνοντας τη μετουσίωση του.
8. Η βέλτιστη θερμοκρασία αντίδρασης είναι 25℃.Εάν η θερμοκρασία είναι πολύ υψηλή ή πολύ χαμηλή, η ευαισθησία ανίχνευσης και η τιμή OD θα αλλάξουν.

 

9. Αποθήκευση και ημερομηνία λήξης

Αποθήκευση: Αποθηκεύστε στους 2-8 ℃, όχι κατεψυγμένο.
Ημερομηνία λήξης: 12 μήνες;Η ημερομηνία παραγωγής αναγράφεται στο κουτί.
Σημείωση: Εάν η συσκευασία Vacuum της μικροπλάκας έχει διαρροή, εξακολουθεί να ισχύει για χρήση, μην επηρεάζετε το αποτέλεσμα της δοκιμής, χαλαρώστε στη χρήση.

 

 

 

 

 

Q1: Πότε θα αποσταλεί;
A1: Θα στείλουμε τα αγαθά για εσάς το συντομότερο δυνατό εντός 7 εργάσιμων ημερών από τη λήψη της πληρωμής.(Σε περίπτωση εξωτερικών παραγόντων όπως η επιδημία, ο τοκετός μπορεί να καθυστερήσει)

 

Ε2: Υποστηρίζει OEM/ODM;
A2: Μπορεί να υποστηριχθεί, αλλά η συγκεκριμένη ποσότητα πρέπει να είναι περισσότερα από 100.000 τεμάχια, κάτι που είναι βολικό για προσαρμοσμένα προϊόντα.

 

Ε3: Πώς είναι το εργοστάσιό σας όσον αφορά τον ποιοτικό έλεγχο;
A3: Έχουμε πιστοποιήσει εθνικά ISO9001 και ISO13485.Η διαδικασία παραγωγής μας συμμορφώνεται με τις τυπικές διαδικασίες για τη διασφάλιση της βέλτιστης ποιότητας των προϊόντων.

 

Ε4: Πώς να παρέχετε την εξυπηρέτηση μετά την πώληση;
A4: Παρέχουμε επαγγελματική ηλεκτρονική τεχνική εξυπηρέτηση μετά την πώληση.Μπορούμε να σας παρέχουμε καθοδήγηση ένας προς έναν μέσω βίντεο, τηλεφώνου κ.λπ.

 

Ε5: Ποια είναι η μέθοδος πληρωμής;
A5: Λαμβάνουμε πληρωμή από T/T.

 

Ε6: Πώς να στείλετε;
A6: Επιλέξτε την καλύτερη μέθοδο αποστολής για εσάς, λαμβάνοντας προσφορές από τους πολλούς συνεργαζόμενους μεταφορείς μας και αποστέλλετε επίσης σύμφωνα με τις απαιτήσεις σας.