Γρήγορη εξάρτηση δοκιμής γάλακτος της ELISA μελαμινών για το γάλα 96Wells/Kit ISO9001 ανίχνευσης

Melamine ELISA Test Kit for Detection Milk 96 Wells/Kit ISO9001

 

1. Αρχή

Αυτό το κιτ δοκιμής βασίζεται στην έμμεση ανταγωνιστική ενζυμική ανοσοδοκιμασία για την ανίχνευση μελαμίνης στο δείγμα.Το αντιγόνο σύζευξης είναι προεπικαλυμμένο στις λωρίδες μικρο-φρεατίων.Η μελαμίνη στο δείγμα και τα αντιγόνα σύζευξης που είναι προεπικαλυμμένα στις λωρίδες των μικροφρεατίων ανταγωνίζονται για αντισώματα κατά της μελαμίνης.Μετά την προσθήκη του συζυγούς ενζύμου, το υπόστρωμα TMB προστίθεται για χρωματισμό.Η τιμή οπτικής πυκνότητας (OD) του δείγματος δοκιμής έχει αρνητική συσχέτιση με τη συγκέντρωση μελαμίνης στο δείγμα.Αυτή η τιμή συγκρίνεται με την τυπική καμπύλη και στη συνέχεια λαμβάνεται η συγκέντρωση μελαμίνης.

 

 

2.Κιτ δοκιμής γάλακτοςΣυστατικά

1	Λωρίδες μικρο-πηγαδιού	12 λωρίδες με 8 αφαιρούμενες πηγάδια το καθένα
2	6× πρότυπο διάλυμα (1 mL το καθένα)	0ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Πρότυπο διάλυμα Spiking	1 ppm	1 ml
4	Σύζευγμα ενζύμου	7 ml	κόκκινο καπέλο
5	Διάλυμα εργασίας αντισωμάτων	7 ml	μπλε καπάκι
6	Υπόστρωμα Α	7 ml	άσπρο καπέλο
7	Υπόστρωμα Β	7 ml	μαύρο καπέλο
8	Διακοπή λύσης	7 ml	κίτρινο καπάκι
9	10x διάλυμα εκχύλισης δείγματος	50 ml	διαφανές καπάκι
10	20x διάλυμα εκχύλισης δείγματος Β	50 ml	μπλε καπάκι
11	20× συμπυκνωμένο ρυθμιστικό πλύσης	15 ml	άσπρο καπέλο

 

3. Τεχνικές προδιαγραφές

Ευαισθησία: 0,5ppb

Θερμοκρασία θερμοκοιτίδας: 25℃

Χρόνος θερμοκοιτίδας: 30 λεπτά έως 15 λεπτά

Οριο ανίχνευσης:

Βούτυρο, καραμέλα, τυρί 10 ppb

Ρυθμός διασταυρούμενης αντίδρασης:

Μελαμίνη 100%

Ποσοστό ανάκτησης:

Βούτυρο 90±25%

Καραμέλα, τυρί 95±25%

 

4. Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται

1) Εξοπλισμός: συσκευή ανάγνωσης μικροπλακών, εκτυπωτής, στροβιλισμός, φυγόκεντρος, πιπέτες μέτρησης, ζυγοστάθμιση (αμοιβαία ευαισθησία 0,01 g), λουτρό νερού 70℃.

2) Μικροπιπέτες: μονοκάναλος 20~200 μL, 100~1000 μL.και πολυκαναλικό 30~300 μl.

 

5. Προεπεξεργασία δείγματος

Οδηγίες (Τα ακόλουθα σημεία πρέπει να ληφθούν υπόψη πριν από την προεπεξεργασία)

1) Μόνο τα ρύγχη μιας χρήσης μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τα πειράματα και τα ρύγχη πρέπει να αλλάζονται όταν χρησιμοποιούνται για διαφορετικά αντιδραστήρια.

2) Πριν από το πείραμα, κάθε πειραματικός εξοπλισμός πρέπει να είναι καθαρός και θα πρέπει να καθαρίζεται εκ νέου εάν είναι απαραίτητο, προκειμένου να αποφευχθεί η μόλυνση που παρεμποδίζει τα πειραματικά αποτελέσματα.

Προετοιμασία διαλύματος

1) Εξαγωγή δείγματος Ένα διάλυμα

Αραιώστε 10x διάλυμα εκχύλισης δείγματος με απιονισμένο νερό σε αναλογία 1:9.

2) Διάλυμα Β εξαγωγής δειγμάτων

Αραιώστε 20x διάλυμα εκχύλισης δείγματος Β με απιονισμένο νερό σε αναλογία 1:19.

 

5.1 Βούτυρο

1) Πάρτε 1 g φρέσκο ​​βούτυρο σε σωληνάριο φυγοκέντρησης 50 ml, προσθέστε 5 ml διάλυμα εκχύλισης δείγματος, επωάστε σε υδατόλουτρο 70 ℃ για 5 λεπτά, αναδεύστε και ανακινήστε για 5 λεπτά, φυγοκεντρήστε σε πάνω από 4000 r/min σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά.

2) Πάρτε 50 ul υγρού κάτω στρώματος για ανάλυση

Αναδίπλωση αραίωσης δείγματος: 5

5.2 Καραμέλα, τυρί

1) Πάρτε 1 g φρέσκου δείγματος σε σωληνάριο φυγοκέντρησης 50 ml, προσθέστε 5 ml διάλυμα εκχύλισης δείγματος Β, επωάστε σε υδατόλουτρο 70 ℃ για 5 λεπτά, αναδεύστε και ανακινήστε για 5 λεπτά, φυγοκεντρήστε σε πάνω από 4000 r/min σε θερμοκρασία δωματίου για 5 λεπτά.

2) Πάρτε 50 ul υγρού κάτω στρώματος για ανάλυση

Αναδίπλωση αραίωσης δείγματος: 5

 

6. Διαδικασίες ELISA

6.1 Οδηγίες

1 Φέρτε όλα τα αντιδραστήρια και τις ταινίες μικροπηγαδιών σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃).

2 Επιστρέψτε όλα τα αντιδραστήρια στους 2-8 ℃ αμέσως μετά τη χρήση.

3 Η επαναληψιμότητα της ανάλυσης ELISA, σε μεγάλο βαθμό, εξαρτάται από τη συνοχή του πλυσίματος των πλακών.Η σωστή λειτουργία του πλυσίματος των πιάτων είναι το βασικό σημείο στις διαδικασίες του ELISA.

4 Για την επώαση σε σταθερές θερμοκρασίες, όλα τα δείγματα και τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφεύγουν την έκθεση στο φως και κάθε μικροπλάκα θα πρέπει να σφραγίζεται από την καλυπτική μεμβράνη.

6.2 Διαδικασίες λειτουργίας

1)Φέρτε το κιτ δοκιμής σε θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) για τουλάχιστον 30 λεπτά, σημειώστε ότι κάθε αντιδραστήριο πρέπει να ανακινείται ομοιόμορφα πριν από τη χρήση.τοποθετήστε τις απαιτούμενες λωρίδες μικρο-πηγαδιών σε πλαίσια πλακών.Επανασφραγίστηκε η αχρησιμοποίητη μικροπλάκα, αποθηκευμένη στους 2-8 ℃, όχι κατεψυγμένη.

2)Προετοιμασία διαλύματος: αραιώστε 15 mL του ρυθμιστικού διαλύματος πλύσης 20X με το απιονισμένο νερό στα 300 mL για χρήση.

3)Αρίθμηση: αριθμήστε τα μικροφρεάτια σύμφωνα με τα δείγματα και το πρότυπο διάλυμα.Κάθε δείγμα και πρότυπο διάλυμα πρέπει να εκτελούνται εις διπλούν.καταγράψουν τις θέσεις τους.

4)Προσθέστε 50µL του δείγματος/τυποποιημένου διαλύματος για να διαχωρίσετε διπλά φρεάτια, στη συνέχεια προσθέστε 50μL συζυγούς ενζύμου, στη συνέχεια προσθέστε 50μL διαλύματος εργασίας αντισώματος σε κάθε φρεάτιο, ανακινήστε σωστά, σφραγίστε τη μικροπλάκα με την καλυπτική μεμβράνη και επωάστε στους 25℃ για 30 λεπτά.

5)Χύστε το υγρό από τα φρεάτια, πλύνετε τη μικροπλάκα με το αραιωμένο ρυθμιστικό διάλυμα πλύσης στα 250 µL/φρεάτιο για 5-6 φορές.Κάθε φορά μουλιάζετε το πηγάδι με το αραιωμένο ρυθμιστικό πλύσης για 15-30 δευτερόλεπτα και στη συνέχεια τυλίγετε για να στεγνώσει σε απορροφητικό χαρτί (αν υπάρχουν οι φυσαλίδες μετά το χτύπημα, κόψτε τις με τις καθαρές μύτες).

6)Χρωματισμός: Προσθέστε 50 μL του υποστρώματος Α και μετά 50 μL του υποστρώματος Β σε κάθε φρεάτιο.Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας το πιάτο με το χέρι, και επωάστε στους 25 ℃ για 15 λεπτά στο σκοτάδι για χρωματισμό.

7)Προσδιορισμός: προσθέστε 50 μL του διαλύματος τερματισμού σε κάθε φρεάτιο.Ανακατέψτε απαλά ανακινώντας το πιάτο με το χέρι.Ρυθμίστε το μήκος κύματος της συσκευής ανάγνωσης μικροπλακών στα 450 nm για να προσδιορίσετε την τιμή OD κάθε φρεατίου.(Συνιστούμε να διαβάσετε την τιμή OD στο διπλό μήκος κύματος 450/630 nm εντός 5 λεπτών).

 

7. Κρίση αποτελέσματος

Υπάρχουν δύο μέθοδοι για να κρίνουμε τα αποτελέσματα.το πρώτο είναι η πρόχειρη κρίση, ενώ το δεύτερο είναι ο ποσοτικός προσδιορισμός.Σημειώστε ότι η τιμή OD του δείγματος έχει αρνητική συσχέτιση με την περιεκτικότητα σε μελαμίνη.

7.1 Ποιοτικός προσδιορισμός

Το εύρος συγκέντρωσης (ng/mL) μπορεί να ληφθεί από τη σύγκριση της μέσης τιμής OD του δείγματος δοκιμής με εκείνη του τυπικού διαλύματος.Υποθέτοντας ότι η τιμή OD του δείγματοςⅠ είναι 0,3 και αυτή του δείγματοςⅡ είναι 1,0, η τιμή OD των τυπικών διαλυμάτων είναι: 2,043 για 0ppb, 1,604 για 0,5 ppb, 1,101 για 1,5 ppb, 0,512 για 4,5 ppb, 0,512 για 4,5 ppb, 4,5 ppb, 4,5 ppb, 1,043 για 0ppb, 1,604 για 0,5 ppb, 0,512 για 4,5 ppb, 4,5 ppb, 4,5 ppb. , 0,055 για 40,5 ppb, κατά συνέπεια το εύρος συγκέντρωσης του δείγματοςⅠ είναι 4,5 έως 13,5 ppb και του δείγματος Ⅱ είναι 1,5 έως 4,5 ppb.

7.2 Ποσοτικός προσδιορισμός

Οι μέσες τιμές των τιμών απορρόφησης είναι ισοδύναμες με το ποσοστό της μέσης τιμής OD (B) του δείγματος δοκιμής και του προτύπου διαλύματος διαιρούμενο με την τιμή OD (B0) του πρώτου πρότυπου διαλύματος (0 πρότυπο) και στη συνέχεια πολλαπλασιάζεται επί 100 %, αυτό είναι

 

Ποσοστό τιμής απορρόφησης =	σι	×100%
	Β0

 

B—η μέση τιμή OD (διπλά φρεάτια) του δείγματος δοκιμής ή του τυπικού διαλύματος

B0—η μέση τιμή OD του τυπικού διαλύματος 0ng/mL

Σχεδιάστε την πρότυπη καμπύλη με τα ποσοστά απορρόφησης των τυπικών διαλυμάτων και τις ημιλογαριθμικές τιμές των προτύπων διαλυμάτων μελαμίνης (ng/mL) ως άξονες Υ και Χ, αντίστοιχα.Διαβάστε την αντίστοιχη συγκέντρωση του δείγματος δοκιμής από την τυπική καμπύλη ενσωματώνοντας το ποσοστό απορρόφησής του στην τυπική καμπύλη.Η τιμή που προκύπτει πολλαπλασιάζεται στη συνέχεια με την αντίστοιχη πτυχή αραίωσης, λαμβάνοντας τελικά τη συγκέντρωση μελαμίνης στο δείγμα.

 

8. Προφυλάξεις

1)Η θερμοκρασία δωματίου κάτω από 25℃ ή η θερμοκρασία των αντιδραστηρίων και τα δείγματα δοκιμής που δεν επιστρέφονται στη θερμοκρασία δωματίου (20-25℃) θα οδηγήσουν σε χαμηλότερη τυπική τιμή OD.

2)Η ξήρανση της μικροπλάκας στη διαδικασία πλύσης θα συνοδεύεται από καταστάσεις που περιλαμβάνουν τις μη γραμμικές τυπικές καμπύλες και την ανεπιθύμητη αναπαραγωγιμότητα.Συνεχίστε λοιπόν στο επόμενο βήμα αμέσως μετά το πλύσιμο.

3)Ανακατέψτε ομοιόμορφα, διαφορετικά θα υπάρξει η ανεπιθύμητη αναπαραγωγιμότητα.

4)Το ενδιάμεσο διάλυμα είναι το διάλυμα θειικού οξέος 2 M, αποφύγετε την επαφή με το δέρμα.

5)Μη χρησιμοποιείτε το κιτ πέραν της ημερομηνίας λήξης του.Η χρήση αραιωμένων ή νοθευμένων αντιδραστηρίων από τα κιτ θα οδηγήσει σε αλλαγές στην ευαισθησία και στις ανιχνευόμενες τιμές OD.Μην αλλάζετε τα αντιδραστήρια από τα κιτ διαφορετικών αριθμών παρτίδας για να τα χρησιμοποιήσετε.

6)Τοποθετήστε την αχρησιμοποίητη μικροπλάκα σε μια σακούλα αυτόματης σφράγισης για να τη σφραγίσετε ξανά.Η τυπική ουσία και ο άχρωμος σχηματιστής χρώματος είναι ευαίσθητοι στο φως και επομένως δεν μπορούν να εκτεθούν απευθείας στο φως.

7)Απορρίψτε το διάλυμα χρωματισμού με οποιοδήποτε χρώμα που υποδηλώνει τον εκφυλισμό αυτού του διαλύματος.Η τιμή ανίχνευσης του τυπικού διαλύματος 1(0 ppb) μικρότερη από 0,5 υποδηλώνει τον εκφυλισμό του.

8)Η βέλτιστη θερμοκρασία αντίδρασης είναι 25 ℃ και οι πολύ υψηλές ή χαμηλές θερμοκρασίες θα οδηγήσουν σε αλλαγές στην ευαισθησία ανίχνευσης και τις τιμές OD.

 

9. Αποθήκευση και ημερομηνία λήξης

Αποθήκευση: Αποθηκεύεται στους 2-8 ℃, όχι κατεψυγμένο.

Ημερομηνία λήξης: 12 μήνες;Η ημερομηνία παραγωγής αναγράφεται στο κουτί

Σημείωση: Εάν η συσκευασία Vacuum της μικροπλάκας έχει διαρροή, εξακολουθεί να ισχύει για χρήση, μην επηρεάζετε το αποτέλεσμα της δοκιμής, χαλαρώστε στη χρήση.

 

 

Ε1: Πόσος χρόνος θα σας πάρει για να στείλετε;
A1: Συνήθως αποστέλλεται εντός 7 εργάσιμων ημερών.

 

Ε2: Υποστηρίζετε OEM/ODM;
A2: μπορεί να υποστηριχθεί.Μπορούμε να προσαρμόσουμε σύμφωνα με τις συγκεκριμένες ανάγκες και τις συγκεκριμένες ποσότητες.

 

Ε3: Πώς είναι το εργοστάσιό σας όσον αφορά τον ποιοτικό έλεγχο;
A3: Έχουμε πιστοποίηση ISO9001 και πιστοποίηση ISO13485, μέχρι στιγμής όλη η διαδικασία παραγωγής, έχουμε τυπικούς κανόνες, συμμορφωνόμαστε με τη σχετική συμπεριφορά και τους νόμους της κυβέρνησης.

 

Ε4: Είναι εγγυημένη η εξυπηρέτηση μετά την πώληση;
A4: Παρέχουμε επαγγελματική ηλεκτρονική τεχνική εξυπηρέτηση μετά την πώληση.Εάν το προϊόν αποτύχει κατά τη διάρκεια του πειράματος, μπορούμε να παρέχουμε
καθοδήγηση ένας προς έναν μέσω τηλεφώνου, βίντεο και άλλων μορφών.

 

Ε5: Ποια είναι η ελάχιστη ποσότητα παραγγελίας σας;
A5: 1 κιτ.

 

Ε6: Ποια είναι η μέθοδος αποστολής;
A6: Μπορεί να αποσταλεί με express (FEDEX, UPS, DHL, EMS, κ.λπ.) ή αεροπορικώς και επίγεια. Επιβεβαιώστε μαζί μας πριν κάνετε μια παραγγελία.