Nitrofuran AOZ δοκιμή ELISA εξαρτήσεων για την ευαισθησία 0.01ppb 96Wells/Kit μελιού γαρίδων ψαριών

Nitrofuran AOZ ELISA εξάρτηση δοκιμής για την ευαισθησία 0.01ppb 96Wells/Kit μελιού γαρίδων ψαριών

 

1. Αρχή

Αυτό το φood γρήγορη εξάρτηση δοκιμής ασφάλειαςείναι βασισμένος ανταγωνιστικό ενζυμικό immunoassay για την ανίχνευση AOZ στο δείγμα. Τα αντιγόνα συζεύξεων είναι καλυμμένα προηγουμένως στα λωρίδες μικροϋπολογιστής-φρεατίων. Το AOZ στο δείγμα και τα αντιγόνα συζεύξεων που καλύπτονται προηγουμένως στα λωρίδες μικροϋπολογιστής-φρεατίων ανταγωνίζονται για τα αντισώματα αντι-AOZ. Μετά από την προσθήκη της ενζυμικής κλίσης, το υπόστρωμα TMB προστίθεται για το χρωματισμό. Η αξία οπτικής πυκνότητας (OD) του δείγματος έχει έναν αρνητικό συσχετισμό με το AOZ σε το. Αυτή η αξία συγκρίνεται με την τυποποιημένη καμπύλη και η συγκέντρωση AOZ λαμβάνεται στη συνέχεια.

2. Συστατικά

1	Μικροϋπολογιστής-καλά λουρίδες	12 λουρίδες με 8 μετακινούμενα φρεάτια κάθε ένα
2	6× τυποποιημένη λύση (1mL κάθε ένα)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	Ενζυμική κλίση	7ml	κόκκινη ΚΑΠ
4	Λύση εργασίας αντισωμάτων	7ml	μπλε ΚΑΠ
5	Υπόστρωμα Α	7ml	άσπρη ΚΑΠ
6	SubstrateB	7ml	μαύρη ΚΑΠ
7	Λύση στάσεων	7ml	κίτρινη ΚΑΠ
8	συγκεντρωμένος 20× πλένοντας απομονωτής	40ml	άσπρη ΚΑΠ
9	2× που συγκεντρώνεται εκ νέου διάλυση της λύσης	50ml	διαφανής ΚΑΠ
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	μαύρη ΚΑΠ

 

3. Τεχνικές προδιαγραφές

Ευαισθησία: 0.01ppb

Θερμοκρασία επώασης: 25℃

Χρόνος επώασης: 30min~15min

Όριο ανίχνευσης

Ιστός, αυγό, μέλι: 0.05ppb

Cross-reaction ποσοστό

AOZ 100%

AMOZ <0>

AHD <0>

SEM <0>

Ποσοστό αποκατάστασης

Ιστός, αυγό 95±25%

Μέλι 85±23%

 

4. Τα υλικά απαίτησαν αλλά παρεχόμενος

1) Εξοπλισμοί: microplate ο αναγνώστης, εκτυπωτής, homogenizer, άζωτο-ξεραίνοντας συσκευή, δίνη, υποβάλλει σε φυγοκέντρωση, η μέτρηση εισάγει στο σιφώνιο, ισορροπία (μια αμοιβαία ευαισθησία 0,01 γ), επωαστήρας, νερό - λουτρό

2) Micropipettors: απλού διαύλου 20-200 µL, 100-1000 µL, και πολυδιαυλικά 30~300 µl

3) Αντιδραστήρια: NaOH, αιθυλικό οξικό άλας, νιτροεξάνιο, HCI (περ. 36,5%), K2HPO4·3H2O

 

5. Προγενέστερη επεξεργασία δειγμάτων

Οδηγίες

Τα ακόλουθα σημεία πρέπει να εξεταστούν πριν από την προγενέστερη επεξεργασία οποιουδήποτε είδους δείγματος:

1) Μόνο οι μίας χρήσης άκρες μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τα πειράματα και τις άκρες πρέπει να αλλάξουν όταν χρησιμοποιούνται για να απορροφήσουν τα διαφορετικά αντιδραστήρια

2) Πριν από το πείραμα, κάθε πειραματικός εξοπλισμός πρέπει να είναι καθαρός και πρέπει να επαν-καθαριστεί εάν είναι απαραίτητο, προκειμένου να αποφευχθεί η μόλυνση που παρεμποδίζει τα πειραματικά αποτελέσματα.

Προετοιμασία λύσης πριν από την προγενέστερη επεξεργασία δειγμάτων:

1) 0,1 Μ K2HPO4: διαλύστε 11,4 γ K2HPO4·3H2O στο εξιοντισμένο νερό σε 500mL.

2) 1 HCL Μ: διαλύστε 8.6mL HCI (περ. 36,5%) στο εξιοντισμένο νερό σε 100mL.

3) 1 NaOH Μ: διαλύστε NaOH 4g στο εξιοντισμένο νερό σε 100mL.

4) το 2×concentrated που ξαναδιαλύει τη λύση είναι αραιωμένο με το εξιοντισμένο νερό στις 1:1 (1mL που συγκεντρώνεται εκ νέου διάλυση της λύσης + εξιοντισμένου του 1mL νερού), που χρησιμοποιούνται για την εκ νέου διάλυση δειγμάτων.

 

5.1 προετοιμασία δειγμάτων

α)Ιστός, αυγό

1) Ζυγίστε 1± 0.05g του ομογενοποιημένου δείγματος, προσθέστε 4mL του αποσταγμένου νερού, του 0.5mL 1 Μ HCI και του 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) σε κάθε σωλήνα, κούνημα κατάλληλα για 2min.

2) Επωάστε at37℃ κατά τη διάρκεια της νύχτας (ώρες approx16) ή επωάστε at56℃ από το νερό - λουτρό (2 ώρες).

3) Προσθέστε το αιθυλικό οξικό άλας 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH και 6mL σε κάθε σωλήνα, κούνημα για τη δεκαετία του '30.

4) Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε ανωτέρω 4000r/min στη θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) για 10min (εάν υπάρχει μετατροπή σε μορφή γαλακτώματος ή το στρώμα αιθυλικού οξικού άλατος δεν είναι αρκετό για 3ml, επωάζει το δείγμα στο νερό 80 ℃ - λουτρό για 10min και υποβάλλει επανειλημμένα ή η ταχύτητα αύξησης και παρατείνει το χρόνο του φυγοκεντρωτή).

5) Η μεταφορά 3mL του στρώματος αιθυλικού οξικού άλατος σε έναν νέο φυγοκεντρικό σωλήνα και εξατμίζει ώσπου να ξεραθεί αεροπορικώς το άζωτο ή σε 50℃.

6) Διαλύστε τα ξηρά υπολείμματα στο νιτροεξάνιο 2mL, προσθέστε 1mL της αραιωμένης λύσης εκ νέου διάλυσης, αναμίξτε κατάλληλα για 30 δευτερόλεπτα, υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε ανωτέρω 4000 r/min στη θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) για 10 λ. Αφαιρέστε τη φάση νιτροεξάνιου επάνω-στρώματος (εάν υπάρχει μετατροπή σε μορφή γαλακτώματος, μετά από να αφαιρέσει τη φάση νιτροεξάνιου επάνω-στρώματος, επωάζει το δείγμα στο νερό 70 ℃ - λουτρό για 10-20min, φυγοκεντρωτής επανειλημμένα).

7) Πάρτε 50 µL του χαμηλότερου για την ανάλυση.

Πτυχές της διάλυσης του δείγματος: 2

 

b) Μέλι

1) Ζυγίστε 2± 0.05g του ομογενοποιημένου δείγματος (μέλι), προσθέστε 4mL του αποσταγμένου νερού, του 0.5mL 1 Μ HCI και των 100 µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) σε κάθε σωλήνα, κούνημα κατάλληλα για 2min.

2) Επωάστε at37℃ κατά τη διάρκεια της νύχτας (ώρες approx16) ή επωάστε at56℃ από το νερό - λουτρό (2 ώρες).

3) Προσθέστε το αιθυλικό οξικό άλας 5mL 0.1M K2HPO4, 0.4mL 1M NaOH και 6mL σε κάθε σωλήνα, κούνημα για τη δεκαετία του '30.

4) Υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε ανωτέρω 4000r/min στη θερμοκρασία δωματίου (20-25℃) για 10min (εάν υπάρχει μετατροπή σε μορφή γαλακτώματος ή το στρώμα αιθυλικού οξικού άλατος δεν είναι αρκετό για 3ml, επωάζει το δείγμα στο νερό 80 ℃ - λουτρό για 10min και υποβάλλει επανειλημμένα ή η ταχύτητα αύξησης και παρατείνει το χρόνο του φυγοκεντρωτή).

5) Η μεταφορά 3mL του στρώματος αιθυλικού οξικού άλατος σε έναν νέο φυγοκεντρικό σωλήνα και εξατμίζει ώσπου να ξεραθεί αεροπορικώς το άζωτο ή σε 50 ℃.

6) Διαλύστε τα ξηρά υπολείμματα στο νιτροεξάνιο 2mL, προσθέστε 1mL της αραιωμένης λύσης εκ νέου διάλυσης, αναμίξτε κατάλληλα για 30 δευτερόλεπτα, υποβάλτε σε φυγοκέντρωση σε ανωτέρω 4000r/min στη θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) για 10 λ. Αφαιρέστε τη φάση νιτροεξάνιου επάνω-στρώματος (εάν υπάρχει μετατροπή σε μορφή γαλακτώματος, μετά από να αφαιρέσει τη φάση νιτροεξάνιου επάνω-στρώματος, επωάζει το δείγμα στο νερό 70 ℃ - λουτρό για 10-20min, φυγοκεντρωτής επανειλημμένα).

7) Πάρτε 50 µL του χαμηλότερου για την ανάλυση.

Πτυχές της διάλυσης του δείγματος: 1

 

6. Διαδικασίες της ELISA

6.1 Οδηγίες

1) Φέρτε όλες τα αντιδραστήρια και μικροϋπολογιστής-καλά τις λουρίδες στη θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) πριν τη χρήση

2) Επιστρέψτε όλα τα αντιδραστήρια αμέσως στη μεταγενέστερη χρήση 2-8 ℃

3) Η δυνατότητα αναπαραγωγής της ανάλυσης της ELISA, σε μεγάλο βαθμό, εξαρτάται από τη συνέπεια της πλύσης πιάτων. Η σωστή λειτουργία της πλύσης πιάτων είναι το σημείο κλειδί στη ELISA οι διαδικασίες

4) Για την επώαση στις σταθερές θερμοκρασίες, όλα τα δείγματα και τα αντιδραστήρια πρέπει να αποφύγουν την ελαφριά έκθεση, και κάθε microplate πρέπει να σφραγιστεί από τη μεμβράνη κάλυψης.

 

6.2 Διαδικασίες λειτουργίας

1) Φέρτε την εξάρτηση δοκιμής στη θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) για τουλάχιστον 30 λ., σημειώνει ότι κάθε αντιδραστήριο πρέπει να τιναχτεί για να αναμίξει ομοιόμορφα πριν τη χρήση, έβαλε τις απαραίτητες μικροϋπολογιστής-καλά λουρίδες στα πλαίσια πιάτων. Ξανασφράγισε το αχρησιμοποίητο microplate, κατάστημα σε 2-8 ℃, παγωμένο.

2) Προετοιμασία λύσης: αραιό 40mL των 20 × συγκέντρωσε τον απομονωτή πλύσης με το εξιοντισμένο νερό στις 1:19 (1 μέρος 20 συγκεντρωμένος × πλένοντας απομονωτής + 19 μέρη εξιοντισμένου νερού). Ή προετοιμαστείτε όπως απαιτείται.

3) Αρίθμηση: αριθμός τα μικροϋπολογιστής-φρεάτια σύμφωνα με τα δείγματα και την τυποποιημένη λύση κάθε δείγμα και η τυποποιημένη λύση πρέπει να εκτελεσθούν εις διπλούν, να καταγράψουν τις θέσεις τους.

4) Προσθέστε 50 µL του δείγματος ή της τυποποιημένης λύσης στα χωριστά διπλά φρεάτια προσθέστε την ενζυμική κλίση έπειτα 50 µL 50 ul της λύσης εργασίας αντισωμάτων σε κάθε μια καλά, μίγμα ήπια με να τινάξει το πιάτο με το χέρι. Σφραγίστε το microplate με τη μεμβράνη κάλυψης, andincubate σε 25 ℃ for30min.

5) Χύστε το υγρό από το microwell, χτυπήστε για να ξεράνετε σε απορροφητικό χαρτί, να προσθέσετε 250 µL/well του απομονωτή πλύσης στο πλύσιμο microplate για 15-30 s, κατόπιν να πάρει έξω και να χτυπήσετε για να ξεράνει με το απορροφητικό έγγραφο, επαναλάβετε 4-5 φορές. (Εάν υπάρχουν οι φυσαλίδες μετά από να χτυπήσουν, τις κόψτε με τις καθαρές άκρες).

6) Χρωματισμός: προσθέστε 50 µL του υποστρώματος Α και έπειτα 50 µL του υποστρώματος Β σε κάθε ένα καλά. Το μίγμα ήπια με να τινάξει το πιάτο με το χέρι, επωάζει έπειτα σε 25 ℃ for15min στο σκοτάδι για το χρωματισμό.

7) Προσδιορισμός: προσθέστε 50 µL της λύσης στάσεων σε κάθε μια καλά. Μίγμα ήπια με να τινάξει το πιάτο με το χέρι. Θέστε το μήκος κύματος του αναγνώστη microplate σε 450nm για να καθορίσετε την αξία OD του κάθε καλά. (Συστήστε να διαβάσετε την αξία OD στο διπλός-μήκος κύματος 450/630nm μέσα σε 5 λεπτά).

 

7. Κρίση αποτελέσματος

Υπάρχουν δύο μέθοδοι για να κρίνουν τα αποτελέσματα: ο πρώτος είναι η τραχιά κρίση, ενώ ο δεύτερος είναι ο ποσοτικός προσδιορισμός. Σημειώστε ότι η αξία OD του δείγματος έχει έναν αρνητικό συσχετισμό με τη συγκέντρωση AOZ.

7.1 ποιοτικός προσδιορισμός

Το διάστημα συγκέντρωσης (ng/mL) AOZ μπορεί να ληφθεί από τη σύγκριση της μέσης αξίας OD του δείγματος με αυτήν της τυποποιημένης λύσης. Να υποθέσουν ότι η αξία OD του δείγματοςⅠ είναι 0,3, και αυτό του δείγματος Ⅱ είναι 1,0, η αξία OD των τυποποιημένων λύσεων είναι: 2,243 για 0ppb, 1,816 για 0.01ppb, 1,415 για 0.03ppb, 0,74 για 0.09ppb, 0,313 για 0.27ppb, 0,155 για 0.81ppb, κατά συνέπεια το διάστημα συγκέντρωσης του δείγματος Ⅰ είναι 0.27ppb σε 0.81ppb, και αυτό του δείγματος Ⅱ είναι 0.03ppb σε 0.09ppb.

7.2 ποσοτικός προσδιορισμός

Οι μέσες τιμές των τιμών απορροφητικότητας λαμβάνονται για τη μέση αξία OD (β) του δείγματος και της τυποποιημένης λύσης που διαιρούνται με την αξία OD (B0) της πρώτης τυποποιημένης λύσης (πρότυπα 0) και που πολλαπλασιάζονται στη συνέχεια με 100%, δηλ.,

 

Ποσοστό της αξίας απορροφητικότητας =	Β	×100%
	B0

 

Η β-μέση αξία OD του δείγματος ή της τυποποιημένης λύσης

B0-μέση αξία OD της τυποποιημένης λύσης 0 ng/mL

Σύρετε την τυποποιημένη καμπύλη με τα ποσοστά απορρόφησης της τυποποιημένης λύσης και τις τιμές semilogarithm της τυποποιημένης λύσης AOZ (ng/mL) ως Υ και Χ-άξονα, αντίστοιχα. Διαβάστε την αντίστοιχη συγκέντρωση του δείγματος από την τυποποιημένη καμπύλη με την ενσωμάτωση του ποσοστού απορρόφησής του στην τυποποιημένη καμπύλη. Η προκύπτουσα αξία πολλαπλασιάζεται στη συνέχεια με τις αντίστοιχες πτυχές διαλύσεων, λαμβάνοντας τελικά τη συγκέντρωση AOZ στο δείγμα.

 

8. Προφυλάξεις

1) Η θερμοκρασία δωματίου κάτω από 25 ℃ ή η θερμοκρασία του μη επιστροφής των αντιδραστηρίων και των δειγμάτων στη θερμοκρασία δωματίου (20-25 ℃) θα οδηγήσει σε μια χαμηλότερη τυποποιημένη αξία OD.

2) Η ξηρότητα του microplate στη διαδικασία πλύσης θα συνοδευθεί από τις καταστάσεις συμπεριλαμβανομένων των μη γραμμικών τυποποιημένων καμπυλών και της ανεπιθύμητης δυνατότητας αναπαραγωγής Έτσι συνεχίστε να περπατείτε έπειτα αμέσως μετά από την πλύση.

3) Μίγμα ομοιόμορφα, διαφορετικά θα υπάρξει η ανεπιθύμητη δυνατότητα αναπαραγωγής.

4) Η λύση στάσεων είναι τα 2 Μ το διάλυμα που θειικού οξέος, αποφεύγει με το δέρμα.

5) Μην χρησιμοποιήστε την εξάρτηση που υπερβαίνει την ημερομηνία λήξης του. Η χρήση των αραιωμένων ή αλλοιωμένων αντιδραστηρίων από τις εξαρτήσεις θα οδηγήσει στις αλλαγές στην ευαισθησία και τις τιμές ανίχνευσης OD. Μην ανταλλάξτε τα αντιδραστήρια από τις εξαρτήσεις των διαφορετικών μερών στη χρήση.

6) Βάλτε το αχρησιμοποίητο microplate σε μια αυτόματος-σφραγίζοντας τσάντα για να το ξανασφραγίσετε. Η τυποποιημένη λύση και το άχρωμο χρώμα προηγούμενες είναι φωτοευαίσθητες, και έτσι δεν μπορούν να εκτεθούν άμεσα στο φως.

7) Απορρίψτε τη λύση χρωματισμού με οποιοδήποτε χρώμα που δείχνει τον εκφυλισμό αυτής της λύσης. Η αξία ανίχνευσης της τυποποιημένης λύσης 1 (ppb 0) λιγότερο από 0,5 δείχνει τον εκφυλισμό της.

8) Η βέλτιστη θερμοκρασία αντίδρασης είναι 25 ℃, και οι πάρα πολύ υψηλές ή πάρα πολύ χαμηλές θερμοκρασίες θα οδηγήσουν στις αλλαγές στις τιμές ευαισθησίας ανίχνευσης και OD.

 

9. Ημερομηνία αποθήκευσης και λήξης

Αποθήκευση: κατάστημα σε 2-8 ℃, παγωμένο.

Ημερομηνία λήξης: 12 μήνες η ημερομηνία της παραγωγής είναι στο κιβώτιο.

Σημείωση: Εάν Vacuum package του microplate έχει τη διαρροή, ισχύει ακόμα να χρησιμοποιήσει, δεν έχει επιπτώσεις στο αποτέλεσμα της δοκιμής, να είναι χαλαρώστε στη χρήση.

 

 

Q1: Πόσο καιρό θα πάρει για σας στο σκάφος;
Α1: Συνήθως σκάφη μέσα σε 7 εργάσιμες ημέρες.

 

Q2: Υποστηρίζετε OEM/ODM;
A2: μπορέστε να υποστηριχθείτε. Μπορούμε να προσαρμόσουμε σύμφωνα με τις συγκεκριμένες ανάγκες και τις συγκεκριμένες ποσότητές σας.

 

Q3: Πώς το εργοστάσιό σας κάνει από την άποψη του ποιοτικού ελέγχου;
A3: Έχουμε την πιστοποίηση ISO9001 και πιστοποίηση ISO13485, μέχρι στιγμής όλη η διαδικασία παραγωγής, έχουμε τους τυποποιημένους κανόνες, συμμορφωνόμαστε με τη σχετικούς συμπεριφορά και τους νόμους της κυβέρνησης.

 

Q4: Η υπηρεσία μεταπωλήσεων εγγυάται;
A4: Παρέχουμε την επαγγελματική σε απευθείας σύνδεση τεχνική υπηρεσία μεταπωλήσεων. Εάν το προϊόν αποτυγχάνει κατά τη διάρκεια του πειράματος, μπορούμε να παρέχουμε
ένα προς ένα καθοδήγηση μέσω του τηλεφώνου, του βίντεο και άλλων μορφών.

 

Q5: Ποια είναι η ελάχιστη ποσότητα διαταγής σας;
A5: 1Kit.

 

Q6: Ποια είναι η μέθοδος ναυτιλίας;
A6: Μπορεί να σταλεί από σαφή (FEDEX, UPS, DHL, EMS, κ.λπ.) ή αεροπορικώς και το έδαφος. Παρακαλώ επιβεβαιώστε με μας πρίν τοποθετεί μια διαταγή.